核心原理：雙抗體夾心法（常用）
小鼠 ELISA 試劑盒主流的技術(shù)路線是雙抗體夾心法，整個(gè)過程可拆解為 4 個(gè)關(guān)鍵步驟，確保檢測的特異性和靈敏度。
包被（Coating）：將針對(duì)目標(biāo)抗原的捕獲抗體固定在酶標(biāo)板的微孔內(nèi)壁上。這一步能確保后續(xù)只結(jié)合樣本中的特定抗原，排除其他雜質(zhì)干擾。
加樣與結(jié)合（Binding）：向微孔中加入待檢測的小鼠樣本（如血清、細(xì)胞上清）。樣本中的目標(biāo)抗原會(huì)與微孔壁上的捕獲抗體特異性結(jié)合，形成 “抗體 - 抗原” 復(fù)合物。
加檢測抗體（Detection）：加入帶有酶標(biāo)記（如辣根過氧化物酶 HRP、堿性磷酸酶 AP）的檢測抗體。該抗體同樣能與目標(biāo)抗原結(jié)合，形成 “捕獲抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)檢測抗體” 的三明治結(jié)構(gòu)。
酶促顯色與讀數(shù)（Coloration & Reading）：加入與酶對(duì)應(yīng)的底物（如 TMB、OPD）。酶會(huì)催化底物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生顏色變化（通常為藍(lán)色或黃色）。目標(biāo)抗原濃度越高，結(jié)合的酶標(biāo)抗體越多，顏色越深。通過酶標(biāo)儀讀取吸光度值，對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計(jì)算出樣本中目標(biāo)抗原的具體濃度。
關(guān)鍵優(yōu)勢(shì)
特異性高：依賴抗原與抗體的特異性結(jié)合，能精準(zhǔn)識(shí)別目標(biāo)物質(zhì)，減少交叉反應(yīng)。
靈敏度高：酶促反應(yīng)可將微弱的抗原 - 抗體結(jié)合信號(hào)放大，能檢測到納克（ng）甚至皮克（pg）級(jí)別的物質(zhì)。

操作便捷：步驟標(biāo)準(zhǔn)化，無需復(fù)雜儀器，普通實(shí)驗(yàn)室即可完成，且可同時(shí)檢測多個(gè)樣本（高通量）。

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