一、樣本處理：源頭減少干擾
規(guī)范樣本采集與保存。血清需用無熱原的試管，血液凝固后 3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘取上清；血漿選擇合適抗凝劑（如 EDTA），離心 30 分鐘后收集上清，避免溶血或凝血不完全。
避免反復(fù)凍融。樣本若不立即檢測，應(yīng)分裝成小份（單次檢測用量），-20℃或 - 80℃冷凍保存，解凍后一次性用完，反復(fù)凍融會導(dǎo)致蛋白變性，增加非特異性反應(yīng)。
嚴(yán)格按說明書稀釋。若樣本中 MAOA 濃度過高，需用試劑盒配套的稀釋緩沖液按比例稀釋，避免因濃度超出線性范圍導(dǎo)致假陽性，禁止使用其他緩沖液替代。
二、試劑管理：保證試劑有效性與特異性
試劑平衡與混勻。試劑盒從 2-8℃冰箱取出后，需在室溫（20-25℃）平衡 20-30 分鐘，避免溫度差異影響反應(yīng)；所有液體試劑（如抗體、底物）使用前需輕輕顛倒混勻，避免劇烈振蕩產(chǎn)生氣泡。
避免試劑交叉污染。加樣時(shí)使用一次性移液器吸頭，每吸取一種試劑或樣本更換一個(gè)吸頭；試劑瓶開封后，瓶口不要接觸任何物品，剩余試劑按說明書要求密封保存，防止污染或揮發(fā)。
確認(rèn)試劑有效期與批次。不使用過期試劑，不同批次的試劑盒組件（如酶標(biāo)板、抗體）不可混用，批次間差異可能導(dǎo)致非特異性結(jié)合，增加假陽性風(fēng)險(xiǎn)。
三、操作流程：嚴(yán)格遵循標(biāo)準(zhǔn)步驟
控制溫育條件。溫育時(shí)需將酶標(biāo)板用封板膜完全密封，防止液體蒸發(fā)或污染；37℃溫育需在恒溫箱或水浴鍋中進(jìn)行，確保溫度穩(wěn)定，避免因溫育時(shí)間不足或溫度波動導(dǎo)致反應(yīng)不充分或非特異性結(jié)合。
規(guī)范洗板操作。手工洗板時(shí)，每孔需加滿洗滌緩沖液，靜置 1 分鐘后徹底甩盡液體，在吸水紙上拍干，連續(xù)洗板 5 次；自動洗板機(jī)需確認(rèn)洗液管路通暢，每孔注液量一致（通常 350μL），避免因洗板不徹底殘留未結(jié)合抗體，引發(fā)假陽性。
及時(shí)終止與讀數(shù)。顯色反應(yīng)完成后，立即加入終止液，終止液需沿孔壁緩慢加入，避免產(chǎn)生氣泡影響 OD 值；讀數(shù)需在 15 分鐘內(nèi)完成，使用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下檢測，確保儀器校準(zhǔn)正常，避免讀數(shù)誤差。
四、環(huán)境與對照設(shè)置：排除外部干擾與驗(yàn)證結(jié)果
控制實(shí)驗(yàn)環(huán)境。實(shí)驗(yàn)需在潔凈、無灰塵的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，避免陽光直射或強(qiáng)光照射（尤其是顯色步驟，需避光孵育）；實(shí)驗(yàn)臺面需清潔，避免殘留其他蛋白類物質(zhì)（如血清、組織液）污染試劑或酶標(biāo)板。

設(shè)置空白對照與陰性對照。每次實(shí)驗(yàn)需設(shè)置空白孔（僅加稀釋緩沖液和底物，不加樣本和抗體）和陰性對照孔（已知不含 MAOA 的大鼠血清 / 血漿），若空白孔或陰性對照孔 OD 值過高，說明存在干擾，需排查原因后重新實(shí)驗(yàn)。

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